|
|
|
|
|
|
|
Постановление Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 27.07.2000 N 40 "О введении в действие санитарных правил"(текст документа по состоянию на январь 2010 года. Архив) обновление Стр. 6 ¦ ¦рание де- ¦ние) ¦Раствор лизола ¦ 10 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦зинфицирую-¦ ¦Раствор крезола ¦ 2 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦щим раство-¦ ¦Раствор хлорно- ¦ 20 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ром с пос- ¦ ¦известкового ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ледующей ¦ ¦молока ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦влажной ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦уборкой ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ +---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+ ¦ 2 ¦Погружение ¦Биологические материалы (кровь, ¦Раствор карболо-¦ 5 ¦5-6 ч¦Для твердых из ¦ ¦ ¦в дезинфи- ¦фекалии, моча), в том числе от- ¦вой кислоты ¦ ¦ ¦расчета 1:2, ¦ ¦ ¦цирующий ¦работанные пробы из объектов ¦Раствор лизола ¦ 10 ¦ ¦для жидких - ¦ ¦ ¦раствор ¦внешней среды. ¦Раствор крезола ¦ 2 ¦ ¦1:1 ¦ ¦ ¦ ¦Посуда лабораторная, предметные ¦Раствор хлорно- ¦ 20 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦и покровные стекла, пипетки ¦известкового ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦молока ¦ ¦ ¦ ¦ +---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------+ ¦ 3 ¦Кипячение ¦Посуда лабораторная, предметные ¦Раствор детер- ¦ 2 ¦ 30 ¦ ¦ ¦ ¦ ¦и покровные стекла, пипетки ¦гента типа "Ло- ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦тос" ¦ ¦ ¦ ¦ ¦---+-----------+--------------------------------+----------------+--------------+-----+---------------- Примечания: 1. Допускается обеззараживание кювет, штативов, канистр, полиэтиленовых мешков и отработанных проб путем заливки двойным объемом крутого кипятка в плотно закрытом сосуде. 2. Допускается использование других отечественных и зарубежных дезинфицирующих средств, зарегистрированных и разрешенных для применения в Республике Беларусь. Приложение 4 к санитарным правилам "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами" БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАБОТЫ ПАРОВОГО СТЕРИЛИЗАТОРА 1. Бактериологический контроль работы стерилизаторов проводят после монтажа и ремонта аппаратуры, а также в процессе их эксплуатации (плановый - 1 раз в месяц и при получении неудовлетворительных результатов контроля). Контроль эффективности работы стерилизаторов осуществляется бактериологическим методом, используя биотесты на основании гибели спор тест-культуры. Биотесты представляют собой флаконы из стеклянной трубки для лекарственных средств ФИ/1-5НС 1 ТУ 64-0709-10-88 (инсулиновые флаконы) или чашечки из алюминиевой фольги (диск размером 14 мм с луночкой - вдавление от неоточенного края карандаша), содержащие высушенные споры тест-культуры Bac. Stearothermophilus ВКМ В-718, помещенные в пакеты из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85). Упакованные тесты нумеруют и размещают в контрольные точки паровых стерилизаторов (5 - 10 тестов). По окончании стерилизации биотесты подвергают бактериологическому исследованию. 2. Штамм Bac. Stearothermophilus ВКМ В-718 - подвижная термофильная палочка, по Граму окрашивается положительно, культивируется при t = (55 +/- 1) °C, исключающей развитие других широко распространенных микроорганизмов. Споры овальные, расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (pH (7,3 +/- 0,1) через 24 ч образует помутнение среды, на мясопептонном агаре (pH (7,3 +/- 0,1) - слабо выпуклые колонии диаметром 2 - 4 мм с ровным краем. Штамм непатогенен для человека и животных. 3. Приготовление биотеста: в ампулу с лиофилизированой культурой вносят 0,2 мл стерильной водопроводной воды и оставляют в течение 30 мин при комнатной температуре. 1 - 2 капли культуры засевают в 2 пробирки с бульоном (МПБ. Хоттингера, питательный сухой) с 0,5% глюкозы. Суточную бульонную культуру засевают в пробирки на скошенный агар (Хоттингера, мясопептонный, сухой питательный). Для получения спор культуру, выращенную на твердой питательной среде, смывают 5 мл стерильной водопроводной воды и переносят во флаконы со скошенным картофельно-пептонным агаром. Взвесь покачиванием флакона равномерно распределяют по поверхности среды, инкубируют при 55 °С в течение 10 - 12 суток в наклонном положении агаром вверх. Для создания достаточной влажности в термостат помещают открытые емкости с водой. На 7, 10 и 12-е сутки проверяют интенсивность спорообразования. Достаточным количеством считают 80 - 90 спор в поле зрения. Культуру смывают стерильной дистиллированной водой. С целью освобождения от вегетативных клеток суспензию прогревают в водяной бане при температуре 65 - 70 °С в течение 30 мин, центрифугируют трехкратно с частотой вращения 2000 об./мин по 15 мин, промывая осадок стерильной дистиллированной водой после каждого центрифугирования. Отмытые споры суспендируют в стерильной дистиллированной воде в соотношении 1:1 по объему. Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре 4 °C в стерильных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками с резиновыми колпачками (срок хранения - 2 года). Чистоту культуры на всех этапах культивирования контролируют высевом на агаровые пластинки. Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной 7 суспензии десятикратно разводят до 10 стерильной дистиллированной водой, высевая на три агаровые пластинки по 0,1 мл 5 7 ориентировочно из 10 - 10 (предел разведения зависит от титра полученных спор). Посевы инкубируют в течение 48 ч, проводят подсчет выросших колоний. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии определяют как среднее арифметическое число колоний с учетом разведения исходной суспензии и объема пробы для посева. Пример расчетов. Предположим, что при посеве на 3 чашки Петри с 5 агаром суспензии в разведении 1:100000 (10 ) подсчитано 140, 110 6 и 134 колонии. Аналогичные высевы из разведений 10 привели к 7 образованию 12, 14 и 16 колоний; из 10 - 5, 3 и 7 колоний. Вычисляем общее число колоний, а затем среднее количество колоний для каждого разведения - 128, 14 и 5. Из расчета посевной дозы (0,1 мл на каждую чашку) вычисляем титры жизнеспособных спор в 1 мл исходной суспензии с учетом разведения, далее находим среднее арифметическое число колоний: 5 7 128 x 10 x 10 = 12,8 x 10 ; 6 7 14 x 10 x 10 = 14,0 x 10 ; 7 7 5 x 10 x 10 = 50,0 x 10 . Таким образом, титр исходной суспензии составит (12,8 + 14,0 + 7 8 + 50,0) x 10 / 3 = 2,5 x 10 спор в 1 мл. Исходная суспензия 7 8 должна содержать не менее 2,5 x 10 - 2,5 x 10 спор в 1 мл. 5 6 Споры в количестве 5 x 10 - 5 x 10 вносят из исходной суспензии с помощью дозатора пипеточного (ТУ 64-1-3329-81) в 0,02 мл в носители (стерильные инсулиновые флакончики с ватно-марлевой пробкой или чашечки из алюминиевой фольги, разложенные в чашки Петри), подсушивают в термостате при температуре 37 °С или в эксикаторе над осушителем (силикогель, хлористый кальций) при комнатной температуре в течение 24 ч. Для определения фактической обсемененности исследуют не менее 3 биотестов от каждой группы. Во флаконы (чашечки) вносят по 1,0 мл стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги отмывают в широкогорлых пробирках с бусами в 10,0 мл) и встряхивают в течение 10 мин на аппарате для встряхивания жидкостей с последующим высевом на 3 агаровые пластинки по 0,1 мл суспензии из 3 последовательных 10-кратных разведений. 4. Определение устойчивости спор тест-культур к действию водяного насыщенного пара под избыточным давлением проводят при температуре (120 +/- 2) °С. Биотесты в упаковочной бумаге помещают в стерилизационной коробке в камеру парового стерилизатора. После набора давления в водопроводной камере (0,11 +/- 0,01) МПа (1,1 +/- 0,1) кгс/кв.см) проводят продувку парового стерилизатора (вытеснение воздуха паром из камеры парового стерилизатора) в течение 10 мин при открытом спускном кране и давлении в стерилизационной камере от 0,01 до 0,02 МПа (от 0,1 до 0,2 кгс/кв.см). После продувки доводят давление пара в стерилизационной камере до (0,11 +/- 0,01) МПа (1,1 +/- 0,1) кгс/кв.см), температуру (120 +/- 2) °С, и через 5 мин (время выживания спор тест-культуры) с момента установления давления спускают пар. Для уменьшения времени воздействия пара до и после экспозиции подъем давления проводят максимум в течение 8 мин, спуск - в течение 3 мин. Аналогичное исследование проводят в течение 15 мин выдержки (время гибели спор тест-культуры). Контроль температуры осуществляют максимальными термометрами. По окончании времени выдержки биотесты вынимают из стерилизатора и проводят бактериологическое исследование. Партию биотестов считают годными для использования, если показатели устойчивости спор тест-культуры соответствуют вышеописанным требованиям. 5. Для определения эффективности работы стерилизатора в обеззараженные биотесты и контрольный тест (без стерилизации) стерильно вносят по 5 мл питательной среды, инкубируют при 55 °C в течение 7 суток при ежедневном просмотре посевов, делая высевы на агаровые пластинки из проросших емкостей. При использовании полусинтетической среды с индикатором феноловым красным рост тест-культуры определяют по изменению красного цвета среды (pH (7,7 +/- 0,1) на желто-оранжевый (pH (6,7 +/- 0,1) за счет разложения глюкозы с образованием кислоты. В целях исключения ложного отрицательного результата (при наличии роста тест-культуры отсутствует изменение цвета питательной среды) флаконы (пробирки) должны быть плотно закрыты стерильными резиновыми пробками (N 7,5; 12,5). Отсутствие роста тест-культуры указывает на эффективность работы стерилизатора. Рост других культур микроорганизмов относят за счет вторичного обсеменения. При наличии роста тест-штаммов проводится повторный контроль на удвоенном количестве биотестов. Если и при повторной проверке тест-культуры не инактивируются, осуществляют тщательный контроль технического состояния аппарата и контрольно-измерительных приборов. При отсутствии роста тест-культуры в контрольном биотесте (не подвергшемся стерилизации) устанавливается причина (нежизнеспособность тест-культуры, несоблюдение методики приготовления биотестов, питательных сред, условий культивирования). 6. Для спорообразования используют: - картофельно-пептонный агар (пептон - 5,0; мел - 1,0; агар - 25,0; картофельная вода - 1000,0 мл), pH - (7,1 +/- 0,1). Сырой картофель (200,0 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды) тщательно моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими ломтиками, заливают водопроводной водой и кипятят 30 мин после закипания (молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и фильтруют в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр. Доводят объем фильтрата до первоначального. Устанавливают pH (7,1 +/- 0,1). Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая до полного растворения агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего добавляют мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120 °С в течение 30 мин. После стерилизации среду во флаконах скашивают; пшеничный агар (пшеничная крупа "Артек" или "Полтавская" - 500,0; агар - 25,0; дистиллированная вода - 1000,0 мл),  |  |
|
|
|