Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 13.08.2008 N 130-А "Об утверждении Санитарных норм, правил и гигиенических нормативов "Гигиенические требования к безопасности парфюмерно-косметической продукции, ее производству и реализации"

(текст документа по состоянию на январь 2010 года. Архив) обновление

Стр. 49

Феноловый красный, индикатор                               ГФ РБ Т. 1.

Цистин (цистеин)

    2.4.Штаммы микроорганизмов

Штамм Staphylococcus aureus, обладающий

ферментом коагулазой, полученный из

государственных коллекций

Допускается применение оборудования и материалов с аналогичными по назначению техническими и метрологическими характеристиками, а также использование других коммерческих питательных сред и диагностических препаратов аналогичного назначения для проведения исследований в соответствии с данным документом. При их применении следует руководствоваться рекомендациями изготовителя. Питательные среды и биологические препараты импортного производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000 или EN 29000, питательные среды и препараты отечественного производства должны вырабатываться по нормативной документации, утвержденной в установленном порядке.

3. Подготовка к микробиологическому анализу.

3.1. Подготовку и стерилизацию посуды для микробиологического анализа производят согласно требованиям СТБ ГОСТ Р 51446-2001 "Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований".

3.2. При взвешивании компонентов сред и испытуемых образцов парфюмерно-косметических изделий допускается погрешность 0,1%.

3.3. Для приготовления растворов реактивов и питательных сред используют дистиллированную воду, если нет специальных указаний, и реактивы квалификации "х.ч." или "ч.д.а.".

3.4. Необходимое значение водородного показателя рН (далее рН) растворов и питательных сред устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 0,1 моль/куб.дм или раствора кислоты соляной объемной долей 0,1 моль/куб.дм. рН растворов и питательных сред определяют с помощью рН-метра. Ориентировочное определение рН растворов и питательных сред допускается проводить с помощью индикаторной бумаги.

4. Приготовление растворов реактивов.

4.1. Изотонический 0,85% раствор хлористого натрия (физиологический раствор).

0,85 г хлористого натрия растворяют в 100 куб.см дистиллированной воды и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.

Хранят при комнатной температуре не более 14 сут.

4.2. 1%-ный раствор твина-80.

1,0 г твина-80 растворяют в 99 куб.см физиологического раствора, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.

Хранят при комнатной температуре не более 14 сут.

4.3. 4%-ный раствор твина-80.

4,0 г твина-80 растворяют в 96 куб.см физиологического раствора, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.

Хранят при комнатной температуре не более 14 сут.

4.4. Раствор фенолового красного массовой концентрации 1%.

0,1 г фенолового красного растирают в ступке, добавляя небольшими порциями 2,82 куб.см 0,1 М раствора натрия гидроокиси и 20 мл 96% спирта. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб.см и доводят водой до метки.

Хранят во флаконе из темного стекла в холодильнике при температуре (+4 - 10) °C в течение 7 суток.

4.5. Раствор малахитового зеленого массовой концентрации 0,5%.

0,5 г малахитового зеленого помещают в стерильный флакон, заливают 100 куб.см горячей дистиллированной воды и помещают на 24 ч в термостат с температурой (37 +/- 1) °C, периодически перемешивая.

Хранят во флаконе из темного стекла в холодильнике при температуре (+4 - 10) °C в течение 7 - 10 суток.

4.6. Приготовление реактива Грисса.

Во флакон со 100 куб.см водного раствора кислоты уксусной с массовой долей 12% вносят 10,0 г сухого реактива Грисса, растворяют при перемешивании.

При отсутствии сухого реактива Грисса его готовят следующим образом:

- раствор N 1: 0,5 г кислоты сульфаниловой растворяют в 30 куб.см ледяной уксусной кислоты, прибавляют 100 куб.см воды дистиллированной, фильтруют через бумажный фильтр. Раствор годен в течение месяца;

- раствор N 2: 0,1 г 1-нафтиламина растворяют в 100 куб.см кипящей дистиллированной воды, охлаждают, прибавляют 30 куб.см ледяной уксусной кислоты, фильтруют через бумажный фильтр. Раствор годен в течение 7 суток.

Перед применением смешивают равные объемы растворов N 1 и N 2.

4.7. Реактив для определения наличия фермента цитохромоксидазы.

Раствор N 1. 1,0 г 1-нафтола растворяют в 100 куб.см спирта этилового.

Раствор N 2. 1,0 г N,N-диметил-п-фенилендиамин дигидрохлорида растворяют в 100 куб.см дистиллированной воды.

Перед употреблением смешивают растворы N 1 и N 2 в соотношении 2:3.

Хранят во флаконах из нейтрального светозащитного стекла при температуре (4 - 10) °C в течение 14 сут.

5. Приготовление питательных сред.

5.1. Среды для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных бактерий.

5.1.1. Мясо-пептонный агар с глюкозой.

В колбу с 1 куб.дм мясопептонного бульона (далее МПБ) вносят 10,0 г пептона, 5,0 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы. Все ингредиенты растворяют, прибавляют 13,0 г агара микробиологического, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения агара при перемешивании, фильтруют в горячем виде через воронку с ватно-марлевым или бумажным фильтром, устанавливают рН (7,3 +/- 0,1), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 1 месяца.

Вместо МПБ можно использовать перевар Хоттингера с концентрацией аминного азота не менее 100 мг/куб.дм.

5.1.2. Питательный агар "МК" с глюкозой.

В колбе с 1 куб.дм воды дистиллированной растворяют 20,0 г Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, прибавляют 13,0 г агара микробиологического, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения агара при перемешивании, фильтруют в горячем виде через воронку с ватно-марлевым или бумажным фильтром, устанавливают рН (7,3 +/- 0,1), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 1 месяца.

Допускается использовать агар сухой питательный для культивирования микроорганизмов или питательную среду N 1 сухую.

5.2. Среды для выращивания плесневых грибов и дрожжей (Сабуро).

5.2.1. Среда для выращивания плесневых грибов и дрожжей (Сабуро).

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 40,0 г глюкозы или мальтозы, прибавляют 13,0 г агара микробиологического, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения всех компонентов при перемешивании, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН (5,8 +/- 0,2), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (112 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 1 месяца.

Допускается использовать питательную среду N 2 сухую.

5.2.2. Среда Сабуро жидкая.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 40,0 г глюкозы или мальтозы, нагревают смесь на электроплитке до полного растворения всех компонентов при перемешивании, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН (5,8 +/- 0,2), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (112 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.3. Среды обогащения для бактерий семейства Enterobacteriaceae.

5.3.1. Среда для выращивания бактерий семейства Enterobacteriaceae.

В колбу с 1 куб.дм воды дистиллированной вносят 20,0 г пептона сухого ферментативного или Бактофока-МК, 7,5 г натрия фосфат двузамещенного, 2,5 г калия фосфат однозамещенного. Смесь перемешивают при нагревании до полного растворения солей, вносят 10,0 г глюкозы, прибавляют 8 куб.см 1%-ного водного раствора фенолового красного и 3 куб.см 0,5%-ного водного раствора малахитового зеленого, устанавливают рН (7,5 +/- 0,1), нагревают до полного растворения компонентов, фильтруют через бумажный фильтр, разливают во флаконы по 100 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) С° в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.3.2. Среда Мак-Конки.

В колбу с 1 куб.дм воды дистиллированной вносят 20,0 г пептона сухого ферментативного или Бактофока-МК, 10,0 г лактозы, 5,0 г желчи сухой, 0,01 г бромкрезолового пурпурного. Все ингредиенты растворяют в воде, нагревают до полного растворения компонентов, устанавливают рН (7,5 +/- 0,1), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы по 100 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

Допускается использовать среду N 3 сухую.

5.4. Питательные среды для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae.

5.4.1. Агар Эндо.

Готовят из среды Эндо сухой по указанию (прописи) на этикетке. Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 5 сут.

5.4.2. Среда для определения ферментации глюкозы.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г хлорида натрия, растворяют при нагревании, вносят 40,0 г глюкозы, прибавляют 8 куб.см 1%-ного водного раствора фенолового красного, устанавливают рН (7,4 +/- 0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки с поплавками по (4 - 5) куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. По окончании стерилизации среду как можно скорее охлаждают.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

Допускается использовать среду N 6 сухую.

5.4.3. Среда для определения восстановления нитратов в нитриты.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 5,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида, 1,5 г калия нитрата, растворяют при перемешивании и нагревании, устанавливают рН (7,2 +/- 0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по (4 - 5) куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

Допускается использовать среду N 7 сухую.

5.4.4. Среда Хью-Лейфсена.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 2,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 10,0 г глюкозы, 5,0 г натрия хлорида, 0,3 г калия фосфорнокислого двузамещенного, добавляют 3,0 г агара микробиологического, растворяют при перемешивании и нагревании, кипятят на электроплитке в течение 2 - 3 мин, устанавливают рН (7,4 +/- 0,1), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки по 10 - 15 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Цвет среды до автоклавирования - синий, после - травянисто-зеленый.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.5. Среды для обогащения бактерий вида Pseudomonas aeruginosa.

5.5.1. Мясо-пептонный бульон с глюкозой.

В колбу с 1 куб.дм мясной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого, 5,0 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, растворяют при перемешивании и нагревании, устанавливают рН (7,3 +/- 0,2), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы по 100 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.5.2. Питательный бульон "МК" с глюкозой.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г Бактофока-МК, 1,0 г глюкозы, 5,0 г натрия хлорида. Все ингредиенты растворяют при перемешивании и нагревании, устанавливают рН (7,3 +/- 0,2), фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы по 100 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.5.3. Среда для обогащения бактерий вида Pseudomonas aeruginosa.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида, 2,5 г калия фосфорнокислого двузамещенного, растворяют при перемешивании и нагревании, вносят 2,5 г глюкозы, устанавливают рН (7,3 +/- 0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают во флаконы по 100 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

Допускается использовать среду N 8 сухую.

5.6. Среда для выявления пигмента пиоцианина (Среда Кинг-А).

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 20,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г магния хлорида безводного, 1,0 г калия сульфата безводного. Все ингредиенты растворяют в воде и оставляют на 15 мин. Затем вносят 10,0 куб.см глицерина, тщательно перемешивают, растворяют при нагревании, устанавливают рН (7,2 +/- 0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, прибавляют агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

Допускается использовать среду N 9 сухую.

5.7. Среды для обогащения бактерий вида Staphylococcus aureus.

5.7.1. Солевой бульон.

В колбу со 100 куб.см мясо-пептонного бульона вносят 6,0 г хлорида натрия, устанавливают рН (6,9 +/- 0,1),разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.7.2. Среда, приготовленная по 5.5.3.

Допускается использовать среду N 8 сухую.

5.8. Среды для идентификации бактерий вида Staphylococcus aureus

5.8.1. Желточно-солевой агар.

Эмульсия яично-желточная: куриное яйцо протирают ватой, смоченной этиловым спиртом, помещают в стерильную чашку Петри, стерильным инструментом пробивают с противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно отверстие полностью удаляют белок, затем, увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу с 50 куб.см физиологического раствора, содержимое встряхивают до однородной массы.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 72 ч.

1 дм мясо-пептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95,0 г хлористого натрия, охлаждают до температуры (45 +/- 1) °C и добавляют 100 см яично-желточной эмульсии. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 5 сут.

5.8.2. Агар Байрд-Паркер.

В 1 куб.дм одной из питательных сред, приготовленных по п. 5.5.1 или п. 5.5.2 вносят 17,9 г лития хлорида, 15 г агара микробиологического в волокнах или порошке, 5,0 г мясного экстракта и 5,0 куб.см экстракта дрожжевого, перемешивают и нагревают до полного растворения компонентов. Охлаждают до 50 - 60 °C, устанавливают рН (6,9 +/- 0,1), разливают во флаконы по 100 куб.см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

К 90 см основы среды добавляют асептически 5,0 см желточной эмульсии и стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 см раствора глицина концентрации 200 г/дм, 5,0 см раствора пирувата натрия концентрации 200 г/дм и 1,0 см раствора теллурита калия концентрации 10 г/дм.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 48 часов.

5.8.3. Маннитно-солевой агар.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 75,0 г натрия хлорида безводного, 10,0 г маннита. Все ингредиенты растворяют в воде, затем вносят 2,5 куб.см 1%-ного раствора фенолового красного, тщательно перемешивают, устанавливают рН (7,6 +/- 0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, прибавляют агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

Допускается использовать среду N 10 сухую (для индетификации стафилококков).

5.8.4. Среда Гисса с маннитом и мальтозой.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 10,0 г пептона ферментативного сухого или Бактофока-МК, 5,0 г натрия хлорида безводного, 10,0 г маннита или мальтозы. Все ингредиенты растворяют в воде, затем вносят 2,5 куб.см 1%-ного раствора фенолового красного, тщательно перемешивают, устанавливают рН (7,6 +/- 0,2), кипятят на электроплитке в течение 1 мин, прибавляют заранее замоченный агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (115 +/- 1) °C в течение 15 мин.

Хранят при температуре (+4 - 10) °C не более 14 сут.

5.9. Среда для контроля стерильности (тиогликолевая).

Среду готовят в соответствии с указаниями на этикетке или по следующей прописи.

В колбу с 1 куб.дм дистиллированной воды вносят 15,0 г панкреатического гидролизата казеина, 5,0 г дрожжевого экстракта, 2,5 г натрия хлорида, 5,0 г глюкозы, 0,75 г цистина (цистеина), 0,5 г тиогликолевой кислоты или тиогликолята натрия, 1 куб.см раствора резазурина натрия (1:1000). Все ингредиенты растворяют в воде, прибавляют замоченный заранее агар микробиологический, нагревают до полного растворения всех компонентов, устанавливают рН (7,2 +/- 0,2), фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.

Хранят при температуре (10 - 25) °C в защищенном от света месте в течение 7 сут.

6. Отбор проб для микробиологического анализа.

6.1. При отборе проб следует руководствоваться требованиями Инструкции "Порядок проведения отбора образцов парфюмерно-косметической продукции для испытания в целях государственной гигиенической регистрации и сертификации".

6.2. Пробы парфюмерно-косметических изделий для микробиологического анализа отбирают до отбора проб для физико-химических, органолептических и других видов испытаний с соблюдением правил асептики, чтобы исключить вторичное загрязнение продукта.

6.3. От каждой партии парфюмерно-косметических изделий, подлежащих контролю, следует брать не менее трех единиц изделий в потребительской таре (упаковке), которая не должна иметь следов повреждений.

6.4. При испытаниях на стерильность от каждой партии парфюмерно-косметических изделий, независимо от ее объема, отбирают 10 ампул или 10 других единиц упаковки.

6.5. Пробу, отобранную от отдельной единицы упаковки, называют разовой. Количество продукта в разовых пробах из каждой единичной упаковки должно быть одинаковым. Разовые пробы соединяют, перемешивают и составляют среднюю пробу.

7. Подготовка проб для определения микробиологической чистоты парфюмерно-косметической продукции

7.1. Для подготовки к анализу следует использовать образцы испытуемых парфюмерно-косметических изделий с ненарушенной упаковкой и не подвергавшихся внешнему воздействию.

Перед вскрытием упаковки место соединения крышки с тарой обрабатывают 70%-ным раствором этилового спирта. Первую порцию в количестве примерно 10% содержимого упаковки отбрасывают, затем отбирают пробы и переносят в стерильную колбу или флакон вместимостью (100 - 200) куб.см.

7.2. Для испытания готовят среднюю пробу не менее 30 г (куб.см) из упаковок, отобранных по п. 6.3, и состоящую из равных разовых проб. При получении неудовлетворительных результатов анализа хотя бы по одному из микробиологических показателей проводят повторный анализ удвоенного объема выборки из той же партии. Результаты повторного анализа распространяются на всю партию.

В случае если масса (объем) парфюмерно-косметического средства в единичной упаковке менее 10 г (куб.см), содержимое исследуют полностью или используют большее количество упаковок.

7.3. (10,0 +/- 0,1) г (куб.см) средней пробы отбирают с соблюдением правил асептики и помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие (90 +/- 1) куб.см 1%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе (по п. 4.2). Смесь тщательно перемешивают до полной гомогенизации. При необходимости пробы нагревают на водяной бане или в термостате до (40 - 45) °C, но не более 10 мин. Для гомогенизации продукции, плохо растворимой в воде, используют стеклянные бусы.

Эмульсии типа вода - масло подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе (по п. 4.3) и предварительно (до встряхивания) прогревая на водяной бане или в термостате до (40 - 45) °C в течение 20 мин.

     Получают   смесь,   в  10  куб.см  которой  содержится  1  г  (куб.см)

-1

парфюмерно-косметического  средства  -  первое  разведение  1:10  (10  ). 1

куб.см  материала  из  первого  разведения  переносят в пробирку с 9 куб.см

стерильного   физиологического   раствора,  перемешивают  новой  стерильной

-2

пипеткой  и  получают  второе  разведение 1:100 (10  ). 1 куб.см из второго

разведения   переносят   в   следующую  пробирку  с  9  куб.см  стерильного

физиологического   раствора,   перемешивают  новой  стерильной  пипеткой  и

-3

получают  третье  разведение  1:1000 (10  ) и т.д. В результате исследуемая

                                              -2           -3

продукция  оказывается  разведенной  в 100 (10  ), 1000 (10  ) и более раз.

Полученные разведения используют для посевов.

Допускается производить посев жидких форм парфюмерно-косметической продукции в нативном виде в необходимых для анализа количествах.

7.4. Анализ подготовленных образцов должен быть выполнен в течение 30 мин. При невозможности выполнения этого условия анализ допускается проводить не позже чем через 3 часа после подготовки проб, сохраняя их в холодильнике при (+4 -10) °C.

8. Подготовка проб к анализу на стерильность парфюмерно-косметической продукции.

8.1. Перед вскрытием ампулы с парфюмерно-косметической продукцией обрабатываются этиловым спиртом. Шейку ампулы осторожно прогревают в пламени горелки. На хорошо прогретую шейку ампулы капают 1 каплю стерильного физиологического раствора (по п. 4.1). Ампулы осторожно вскрывают по месту образовавшейся в стекле трещины.

8.2. Содержимое 10 ампул или 10 других упаковок объединяют в единую пробу. Из объединенной пробы отбирают стерильно (10,0 +/- 0,1) г (куб.см) парфюмерно-косметического средства.

При испытаниях методом прямого посева отобранные пробы непосредственно засевают в соответствующие питательные среды.

При испытаниях методом мембранных фильтров отобранные пробы помещают в стеклянные колбы или флаконы, содержащие (90 +/- 1) куб.см 1%-ного раствора твина-80 в физиологическом растворе, пропущенного через мембранный фильтр с размером пор (0,45 +/- 0,02) мкм. Пробы тщательно перемешивают в течение 15 - 20 мин до полной гомогенизации.

При испытаниях масляных растворов пробы подготавливают аналогичным способом, используя 4%-ный раствор твина-80 в физиологическом растворе, предварительно (до встряхивания) прогревая на водяной бане или в термостате до (40 - 45) °C в течение 20 мин.

10. При определении микробиологической чистоты парфюмерно-косметической продукции используют стандартизированные методы микробиологического посева. Определяют следующие группы микроорганизмов: мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, плесневые грибы и дрожжи, бактерии семейства Enterobacteriaceae, бактерии вида Staphylococcus aureus, бактерии вида Pseudomonas aeruginosa.

В микробиологических лабораториях, осуществляющих контроль качества и безопасности парфюмерно-косметической продукции, допускается применение импедансных методов для проведения исследований с использованием микробиологических анализаторов в соответствии с нормативными документами, утвержденными в установленном порядке.

11. Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ).

11.1. Сущность метода.

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов при культивировании посевов в аэробных условиях при температуре (30 +/- 1) °C в течение (72 +/- 3) часов и в последующем пересчете их количества на 1 г (куб.см) исследуемого продукта.

11.2. Проведение анализа.

11.2.1. Метод глубинного посева.

Исследуемый материал в количестве 1 куб.см из соответствующего разведения (или 1 куб.см нативного продукта в жидкой форме) вносят стерильной пипеткой в две параллельные чашки Петри и не позже, чем через 15 мин заливают расплавленной и охлажденной до (45 +/- 1) °C одной из сред по п. 5.1 в количестве (10 - 15) куб.см. Быстро перемешивают, аккуратно вращая чашку по поверхности стола.

После застывания среды чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (30 +/- 1) °C в течение (72 +/- 3) часов.

11.2.2. Двухслойный агаровый метод.

Исследуемый материал в количестве 1 куб.см из соответствующего разведения (или 1 куб.см нативного продукта в жидкой форме) вносят стерильной пипеткой в две пробирки с 4 куб.см одной из сред по п. 5.1, предварительно расплавленной и охлажденной до температуры (45 +/- 1) °C. Быстро перемешивают содержимое пробирок и переносят в две параллельные чашки Петри с застывшей средой по п. 5.1, распределяя его равномерно по поверхности среды.

После застывания чашки перемещают в термостат вверх дном и термостатируют при температуре (30 +/- 1) °C в течение (72 +/- 3) часов.

11.3. Обработка и выражение результатов.

Результаты оцениваются по каждой пробе отдельно.

Для количественного подсчета отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 300 колоний микроорганизмов, колонии суммируют и вычисляют среднее арифметическое значение из посевов одного разведения.

Допускается учитывать колонии с помощью лупы с пятикратным увеличением.

Полученное среднее арифметическое число колоний округляют следующим образом:

- если число меньше 100, его округляют до ближайшего числа, кратного 5;

- если число больше 100 и его последняя цифра 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 20;

- если число больше 100 и его последняя цифра не 5, его округляют до ближайшего числа, кратного 10.

Общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (X) вычисляют по формуле:

                                    a x 10

                                X = -------

где a - округленное среднее арифметическое число колоний;

     q - объем посевного материала, внесенного в чашки, куб.см;

     N - степень десятикратного разведения образца продукта.

     Результаты  анализа  выражают  числом (от 1,0 до 9,9) x 10 , где "N" -

соответствующая степень десятикратного разведения продукта.

     Если  среднеарифметическое  значение числа колоний, выросших на чашках

Петри,  в  посевах  одного  разведения  меньше  15,  то результаты выражают

следующим  образом:  количество микроорганизмов меньше 15 умножают на  ----

КОЕ/г (куб.см).

     Если на чашках с разведением 1:10 не обнаружено роста микроорганизмов,

то результаты выражают следующим образом: менее 1,0 x 10  КОЕ/г (куб.см).

Если на чашках выросло более 300 колоний, то учитывают результаты на чашках с последующим разведением.

12. Определение общего количества плесневых грибов и дрожжей.

12.1. Сущность метода.

Метод основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов, типичных по макро- и (или) микроскопической морфологии, на селективной агаризованной питательной среде Сабуро, при культивировании посевов при температуре (24 +/- 1) °C в течение (120 +/- 3) часов и в последующем пересчете их количества на 1 г (куб.см) исследуемого продукта.

««.... 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50